Проявление различных белков чувствительности к химиотерапевтическим препаратам в опухоли Вильмса (нефробластомe): иммуногистохимическое исследование с использованием Tissue microarray (TMA) методологии

Fridman Eduard, Skarda Jozef, Pinthus Jehonathan, Mor Yoram

Институты Патологии и Урологии, Медицинский Центр им. Хаима Шибы, Медицинский факультет, Тель-Авивский Университет, Израиль и Отделение Патологии, Медицинский факультет, Оломоуцкий Университет, Чешская республика.


Введение
   Многие белки, вырабатываемые в организме и в клетках опухолей связаны с устойчивостью тканей и органов к различным химиотерапевтическим препаратам и защищают клетки против таких ядовитых составов. Так в последнее время обнаружен целый ряд таких белков, среди которых Multidrug-resistant protein (MRP-1) (белок, связанный с сопротивлением к множественным лекарственным препаратам), lung-resistant protein (LRP) (лёгoчной белок сопротивления химикатам) и TOPOISOMERASE-2 (Topo-2). Их появление в раковых клетках приводит к изменению мембранного транспорта (MRP-1, LRP) или ферментативной (ТОПО-2) деятельности. Эти белки довольно хорошо изучены на различных эпителиальных опухолях (лёгкое, толстая кишка, молочная железа и т.д.), но до сих пор ни разу не были проверены на нефробластомах (опухоли Вильмса), в которых правильно подобранная комбинация химиотерапевтических препаратов играет существенную роль в выздоровлении больного и профилактике последующих отдалённых осложнений.

Цель работы
   Цель исследования состояла в оценке степени выражения MDR (multidrug-resistant)-связанных белков в нефробластомах (опухоли Вильмса-WT), используя технику построения микроскопических много-тканевых блоков (Tissue microarray-TMA).

Методы
Много-тканевой парафиновый блок (приёмный TMA-блок) был построен из нормальных почечных тканей (служили как внутренний положительный и отрицательный контроль), 14 различных образцов первичных нефробластом от различных пациентов, и от мышиных ксенотрансплантатов, вырасченных от этих первичных опухолей. Каждый опухолевый образец был представлен в приёмном TMA-блоке несколькими (3-4) цилиндрами, каждый по 0.6 мм в диаметре. Таким образом, вновь сконструированный блок содержал 120 цилиндров.

   После сериального срезывания блока на срезы толщиной по 4 микрона, гистологические срезы были окрашены гематоксилином и эозином по стандартной схеме, а затем покрашены иммуногистохимически с антителами против MRP-1, LRP и ТОПО-2 с использованием автоматической машины иммуногистохимической окраски фирмы "Ventana". Индекс интенсивности окраски рассчитывался полу-количественно с учётом процента окрашенных опухолевых клеток и интенсивности окраски.

Результаты
   Все нормальные почечные образцы ткани показывали наличие MRP-1 преимущественно в проксимальных канальцах и были слабо окрашены или отрицательны на LRP и ТОПО-2. Не было окрашивания в нормальных почечных клубочках. Образцы WТ были универсально окрашены MRP-1 (только в канальцевом компоненте опухоли), не было обнаружено окрашивания с окраской на LRP, и было получено неоднородное распределение окраски на ТОПО-2.

   Мышиные ксенотрансплантаты показали различные результаты при окрашивании на MRP-1 и ТОПО-2 и очень слабое или отрицательное окрашивание на LRP.

Выводы
   Данное исследование показало выражение различных белков связанных с устойчивостью к различным химиотерапевтическим препаратам в нефробластомах (опухолях Вильмса). Наши результаты показывают, что среди исследованных белков, только MRP-1 может иметь потенциальную клиническую и терапевтическую роль. Различия между окрашиваниями этих белков в первичных опухолях и в из них вырасщенных мышиных ксенотрансплантатах могут частично объяснить различия в чувствительности к химиотерапии, при сравнении оригинальных опухолей и моделях на животных, которое отмечалось в ряде работ.