Сравнительная оценка определения Chlamydia trachomatis в моче и соскобах из уретры методом ПЦР с использованием разных наборов плазмидных праймеров у больных хроническим фиброзирующим простатитом

Марчук Н.В., Демкин В.В., Морозова Л.Г., Харлашина Л.Я., Евдокимов В.В., Ефремов Е.А., Никушина А.А.
47 ГКУБ,
Институт молекулярной генетики РАН,
ГУ Институт ревматологии РАМН РФ,
ФГУ «НИИ урологии Росздрава»



   Ежегодно в России хламидиоз регистрируется у 1,5 - 2 млн. человек. У 20% мужчин урогенитальный хламидиоз протекает бессимптомно, а у остальных приводит к воспалительным заболеваниям мочеполовых органов и бесплодию.

   Результаты собственных исследований и анализ данных литературы представили нам возможность отобрать для выявления хламидийной инфекции в урогенитальном тракте 2 коммерческие тест-системы: 1-я — тандартная, инвазивная, 2-я — неинвазивная, позволяющая осуществлять скрининговые исследования в моче, а так же провести клиническую оценку лиц с урогенитальной патологией с хламидийной инфекцией в анамнезе.

   В результате исследований соскобов из урогенитального тракта от 52 больных с хроническим простатитом ДНК Chi. trachomatis выявлена у 63,5% больных (33 больных). Это позволило нам отобрать 2 группы больных с хроническим простатитом позитивных и негативных на ДНК Chi. trachomatis и провести параллельное ретестирование образцов, полученных из соскобов из уретры и утренней порции мочи. Методический аспект определения ДНК Chi. trachomatis в моче может быть связан с наличием ложноотрицательных реакций. Сравнительная оценка ПЦР тест-системы с использованием плазмидной ДНК, разработанной в Институте молекулярной генетики РАН, со стандартной коммерческой тест-системой ПЦР диагностики Amplicor (Roche Diagnostic System) позволило выявить совпадающую чувствительность и специфичность этих методов. Параллельное тестирование образцов стандартной коммерческой тест-системы давало в 100% совпадающий результат.

   Выделение ДНК из проб, проведение амплификации, учет результатов проводился в соответствии с инструкцией Института молекулярной генетики РАН и НПО "ЛИТЕХ". “Внутренний" контроль позволял контролировать процесс прохождения реакции амплификации, а так же тестировать наличие в пробах веществ, ингибирующих ПЦР, т.е. была решена проблема получения ложноотрицательных результатов. Анализ результатов параллельного ретестирования в соскобах и образцах мочи позволил выявить следующее.

   ДНК Chi. trachomatis в утренней моче была выявлена у 11 больных из 23, что составило 47,8%, а в соскобах из уретры у 13 больных — 6,5%. В позитивной группе результаты выявления ДНК Chi. trachomatis в утренней моче и соскобах из уретры совпали в 91,3%. 2 несовпадения результатов зарегистрированы как отрицательные в моче, т.к. при проведении исследования был выявлен ингибитор реакции, не было ВК. После повторного ретестирования с разведением мочи процент совпадения составил 100%. Данное несоответствие, возможно, было связано с неправильной транспортировкой материала (моча охлаждена), что еще раз говорит о соблюдении методики не только определения, но и доставки материала. Негативные результаты и контрольная группа совпали полностью. Следовательно, исследование утренней порции мочи для выявления ДНК Chi. trachomatis может быть рекомендовано в качестве неинвазивной тест-системы, обладающей большой чувствительностью. Таким образом, результаты наших исследований показали, что метод, основанный на амплификации ДНК, позволяет обнаруживать Chi. trachomatis в образцах мочи в том же проценте, что и инвазивный метод — анализ соскобов содержимого уретры. «Внутренний» контроль позволяет выявлять наличие ингибиторов при проведении реакции, что имеет особое значение для снижения количества ложнонегативных результатов, в которых реакция амплификации не прошла. Следует подчеркнуть так же, что у 65.85% больных с хроническим и фиброзирующим простатитом в урогенитальном содержимом выявлена Chi. trachomatis.