Cтруктурно-функциональные изменения генов-супрессоров короткого плеча 3 хромосомы при спорадическом светлоклеточном раке почки

Михайленко Д.С., Карякин О.Б., Попов А.М., Сафиуллин К.Н., Лушников Е.Ф., Фомин С.Д., Курынин Р.А., Аляев Ю.Г., Григорян В.А., Еникеев М.Э., Залетаев Д.В.

ГУ Медико-генетический научный центр РАМН, Москва
НИИ Молекулярной медицины при ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова, Москва
ГУ Медицинский радиологический научный центр РАМН, Обнинск
Клиника урологии ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова, Москва.


   Ежегодно в мире регистрируется около 190 тыс. новых случаев рака почки. В 80% случаев опухоль представлена светлоклеточной карциномой, для которой характерна инактивация генов-супрессоров VHL, RASSF1, FHIT и др. В настоящее время различными исследователями прилагаются усилия по объединению клинических и молекулярно-генетических данных для разработки новых диагностических и прогностических критериев при раке почки. В настоящей работе проанализированы 56 образцов унилатерального светлоклеточного рака почки с целью изучения молекулярно-генетических изменений, характерных для этого заболевания. В исследованной выборке 10 пациентов характеризовались наличием метастазов на момент постановки диагноза, у 24 пациентов отмечено распространение первичной опухоли за пределы капсулы почки. По степени дифференцировки опухолей выборка была распределена следующим образом: 19.6% (11/56) образцов с G1, 51.8% (29/56) – G2, 26.8% (15/56) – G3, 1.8% (1/56) – G4. В исследованной выборке не выявлено герминальных мутаций в гене VHL при проведении SSCP-анализа, что позволило исключить наследственные случаи рака почки (синдром Хиппель-Линдау).

   Потери гетерозиготности (ПГ) районов локализаций исследованных генов-супрессоров в опухолевой ткани относительно нормальной почечной паренхимы выявляли с использованием 2 STR-маркеров на каждый ген: D3S1317 и D3S1038 (VHL), D3S966 и D3S1568 (RASSF1), D3S1234 и D3S1300 (FHIT). Статистическую обработку данных проводили с помощью точного критерия Фишера при α = 0.05 с использованием программы GraphPad InStat v. 3.05. Потери гетерозиготности в информативных случаях по генам VHL, RASSF1 и FHIT составили 30.0% (15/50), 25.5% (13/51) и 42.6% (23/54), соответственно. Случаи с ПГ хотя бы одного из исследованных генов составили 71.4% (40/56) от объема выборки. Показано, что ПГ более чем одного из исследованных генов-супрессоров, локализованных в области 3р (VHL, RASSF1, FHIT), ассоциирована с экстраренальным распространением опухолевого процесса (T3-4 по pTNM-классификации) (Р = 0.006, OR = 9.0 (95% CI: 1.7-47.0)). Также ПГ по двум и более исследованным генам, расположенным в области 3р, достоверно чаще встречается при наличии метастазов на момент постановки диагноза (Р = 0.018, OR = 6.7 (95% CI: 1.5-30.1)). Таким образом, инвазия и метастазирование первичной опухоли ассоциированы с потерями гетерозиготности по областям локализаций генов VHL, RASSF1, FHIT.

   Аберрантное метилирование промоторных областей исследованных генов определяли методом метилчувствительной ПЦР. Метилирование хотя бы одного гена из трех (VHL, RASSF1, FHIT) обнаружено в 60.7% (34/56) случаев. Метилирование VHL выявлено в 8.9% (5/56), RASSF1 – в 39.3% (22/56) и FHIT – в 42.9% (24/56) случаев. Метилирование вышеназванных генов наблюдалось на различных стадиях развития опухоли и степенях ее дифференцировки. В 63.6% (7/11) образцов опухолей со степенью дифференцировки G1 определено метилирование, как минимум, одного из исследованных генов, что позволяет рассматривать аберрантное метилирование указанных генов как потенциальный маркер в системе ранней диагностики спорадического светлоклеточного рака почки. Результаты проводимого исследования позволят в дальнейшем сформировать систему прогностических молекулярно-генетических маркеров инвазии и/или метастазирования при раке почки.