Топическая ПЦР-диагностика урогенитальных инфекций у андрологических пациентов

Трещенков Э.А., Жабин С.Г., Маркина Л.А., Колесникова Н.П., Артифексов С.Б., Воевода М.И., Юдин Н.С., Тупикин А.Н., Смагулова Ф.О., Морозов И.В, Нагайцев В.М.
Нижний Новгород; Новосибирск

   Инфекции, передаваемые половым путем (ИППП), составляют значительную долю в структуре общей инфекционной патологии человека. В настоящее время выявлено непосредственное участие возбудителей ИППП в возникновении целого ряда токсических и токсико-аллергических проявлений, доказана возможность некоторых инфектов служить триггерным механизмом развития онкологических, аутоиммунных и многих других соматических заболеваний.

   Учитывая вышеизложенное, существует необходимость дальнейшего совершенствования методов лабораторной диагностики этих инфекций для более точного и, по возможности, скорейшего установления диагноза лечащим врачом с последующим назначением адекватной терапии.
   Значительный прогресс в диагностике ИППП в последние годы обусловлен повсеместным внедрением метода полимеразной цепной реакции (ПЦР), который имеет высокую специфичность, скорость выполнения анализа, универсальность и позволяет определять минимальные количества генетического материала в изучаемых пробах [Рюмин Д.В., Радзинский В.Е., 2000].

   Достаточно часто в клинической практике наблюдается восходящее инфицирование урогенитального тракта, выявление которого нередко затруднено, но чрезвычайно важно для выбора оптимальной лечебной тактики. Кроме того, в ряде случаев латентная инфекция у мужчин локализуется, преимущественно, в простате, семенных пузырьках или яичках и не колонизирует слизистую уретры. Известно, что приблизительно 60% объема спермы образуется в семенных пузырьках, а простата производит около 20% объема семенной жидкости [О.А.Молчанов, С.А.Краевой, 1998]. Поэтому нами была предпринята попытка выявления инфекционных агентов не только в соскобе уретры, но и в эякуляте у пациентов андрологического профиля.

   Всего обследовано 51 пациент 31 из них предъявляли жалобы, характерные для уретрита и (или) простатита (I группа), а 20 человек обратились к андрологу преимущественно с «профилактической» целью (планирование деторождения, оценка фертильности, подозрение на наличие ИППП у половых партнеров и др. (II группа).
   Диагностику проводили методом ПЦР на 5 возбудителей (Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis) с помощью тест-систем, изготовленных в Институте эпидемиологии (Москва). Во всех случаях забор проб осуществляли универсальными зондами-щетками (Aссеlon Multy, Швеция) из уретры, а сперма собиралась в специальные стерильные контейнеры для бактериологического исследования (бакпечатки) сразу после выполнения соскоба слизистой или в течение последующих суток. Выделение ДНК проводили наборами ДНК-Сорб-А (соскобы слизистой уретры) и ДНК-Сорб-В (сперма). Для постановки ПЦР использовали скоростной амплификатор «Терцик» (ДНК-технология, Москва). Для запуска ПЦР применяли «горячий старт», что существенно повышало специфичность и чувствительность анализа. Разделение продуктов амплификации выполняли методом горизонтального электрофореза в камере фирмы «Медиген» в агарозном геле. Регистрацию и анализ результатов проводили с помощью специализированной системы обработки изображений НПФ «Литех» (Москва), в состав которой входят трансиллюминатор, видеокамера, видеокарта и компьютер с пакетом программ. Всего было проведено 190 парных исследования методом ПЦР.

   Наличие ИППП в уретре и (или) сперме зафиксировано у 29 (56,8%) пациента. В I группе пациентов, имеющих клинические проявления уретрита и (или) простатита, перечисленные агенты определялись у 18 человек (35,2%). Выявляемость последних у пациентов II группы составляла 50%.
Наиболее часто в исследованных образцах определялись Ureaplasma urealyticum (31,3%). Поскольку в большинстве случаев клиника заболеваний мочеполовых путей была стертой или совсем отсутствовала, данные микроорганизмы, скорее всего, следует относить к условно-патогенным комменсалам урогенитального тракта, которые развиваются в условиях иммунодефицита и сниженной колонизационной резистентности половых путей вследствие превалирования и манифестации других патогенных инфектов: хламидий, гонококков, трихомонад и др. [Савичева А.М., Башмакова М.А., 1998].

   Обращает на себя внимание достаточно частое выявление в соскобах и (или) сперме Mycoplasma hominis (19,6%), Chlamydia trachomatis (19,6%) и Trichomonas vaginalis (14,2%), что служит основанием для их определения методом ПЦР в повседневной практике.
   Микст-формы ИППП имели место у 9 обследованных мужчин (17,6%). Наиболее часто выявлялась микробная ассоциация Ureaplasma urealyticum+Mycoplasma hominis (6 человек).
   Поиск с помощью ПЦР Neisseria gonorrhoeae проводился у 30 человек. В эякуляте одного из них были обнаружены гонококки, тогда как в соскобе уретры (где найдены также Ureaplasma urealyticum) они отсутствовали. Данный пациент из II группы обратился к андрологу по поводу бесплодия. Во всех остальных случаях результаты ПЦР-анализа на гонорею были отрицательными.

   Результаты расширенного поиска ИППП представлены в таблице 1. Приведенные данные указывают на то, что в 8(15,6%) случаев возбудитель можно обнаружить только в эякуляте. Поэтому ПЦР-анализ эякулята является важным компонентом лабораторного обследования пациентов андрологического профиля.
   46,9% выявленных инфекционных агентов находились либо в эякуляте, либо в уретре, что свидетельствует о гетеротопическом характере колонизации ими репродуктивного тракта и одновременно указывает на то, что далеко не во всех случаях возникает “инфицирование“ спермы при контакте ее со слизистой уретры. Кроме того, у четырех мужчин в переднем и заднем отделах репродуктивного тракта выявлялись различные инфекты.

Возбудитель	Локализация возбудителя
	Уретра	Эякулят	Уретра + эякулят
Chlamydia trachomatis	2	2	6
Ureaplasma urealyticum	6	2	8
Mycoplasma hominis	4	3	3
Trichomonas vaginalis	4	1	2
Всего	16 (31,3%)	8 (15,6%)	19 (37,2%)

Таблица 1. Распределение урогенитальных инфекций в репродуктивном тракте мужчин.(n=51)


   По нашим данным, частота “тотальной колонизации” урогенитального тракта хламидиями, уреаплазмами и микоплазмами среди всех инфицированных достаточно высока и составляет 37,2%. Следует отметить, что у 7 из 8 пациентов этой группы отмечалось латентное течение уретрита и простатита.
   Таким образом, полученные результаты указывают на то, что существует различные варианты распределения ИППП в мочеполовой системе мужчин. Поэтому выполнение ПЦР-детекции широкого круга инфекционных агентов, как в уретре, так и в эякуляте позволяет резко повысить достоверность их лабораторной диагностики. Кроме того, точное выявыление локализации конкретного возбудителя будет, безусловно, способствовать выбору правильной лечебной тактики и обеспечит в дальнейшем адекватный лабораторный контроль эффективности проведенной терапии. Вследствие доказанного неблагоприятного воздействия ИППП на процессы оплодотворения, имплантации и дальнейшие этапы гестационного процесса следует признать необходимым внедрение расширенного ПЦР-анализа при планировании и мониторинге беременности, а также перед проведением инсеминаций и других вспомогательных репродуктивных технологий.